Eficiencia del semen sexado en la fertilización in vitro respecto al no sexado con dos técnicas de capacitación espermática en bovinos

El objetivo de esta investigación es evaluar la fertilidad del semen Holando in-Vitro respecto al no sexado del mismo toro. En programas de reproducción, el rango del sexo es aproximadamente 50/50. En establecimientos lecheros, son de interés las hembras. El semen sexado, ofrece el potencial de optimizar los programas reproductivos, aunque con un costo alto. Una limitante del semen sexado, es su menor fertilidad en inseminación artificial. La FIV podría mejorar las posibilidades de uso de semen sexado, como modelo experimental, así como obtener más embriones del sexo deseado; junto con la técnica de punción folicular in vivo (OPU), que ese aplica a nivel de producción, de vacas selectas, seria de impacto. Los complejos cumulus ovocito (COC) se aspiran de ovarios bovinos de frigoríficos. Se utilizaran los de clase A, se lavan con m_PBS, se cultivan para la maduración en TCM-199 + SFb 5% + LFb 10%, en gotas de 100µl cubiertas de aceite mineral, en incubadora (a 38ºC, con 5% de CO2, 90-95% humedad relativa, 22hs). Los COC serán inseminados con semen procesado con dos métodos de capacitación (gradientes de Percoll y BO). Se realizarán gradientes de Percoll (90-45%) en Talp_Sperm, se centrifugara (500g, 20 min). El pellet obtenido que queda en el fondo del tubo cónico se ajustara a 2x106 espermatozoides/ml. La capacitación en medio B.O, se realizará por centrifugación en medio BO de lavado de semen, el pellet se ajustará a la misma concentración con medio BO de dilución de semen. Se formaran cuatro grupos Grupo 1 (G1): Se fecundará in Vitro con semen sexado a una concentración de 2X106 espermatozoides/ml a razón de 15 COC por gota de 100µl mediante técnica de B.O Grupo 2 (G2): Se fecundara in Vitro con semen no sexado a una concentración de 2X106 espermatozoides/ml a razón de 15 COC por gota de 100µl mediante técnica de B.O Grupo 3 (G3): Se fecundara in Vitro con semen sexado, procesado mediante gradiente de Percoll® Grupo 4 (G4): Se fecundara in Vitro con semen no sexado, procesado mediante gradiente de Percoll® En platina caliente (35-36ºC) se formaran gotas de 100 µl con el semen, se cultivaran con aceite mineral, se colocaran los COC en las gotas y se cultivara en estufa (37ºC, con 5%CO2 y 95%de humedad relativa, 5 a 6 horas).Después de la inseminación, se cultivaran en medio CR1aa + 5 % de SFb, con 5% de CO2 en aire a 38ºC y 90-95% de humedad relativa, en incubadora. A las 48hs, se evaluara la división y el desarrollo celular, a los 7 días se evaluara la calidad embrionaria (normas de la IETS). Se analizaran los resultados por el test de Chi²