Estudios in vivo e in vitro de internalización de la hormona concentradora de melanina (MCH) a través de sus receptores en el núcleo dorsal del rafe: modulación sobre el sistema serotoninérgico y su relación con la depresión.

La hormona concentradora de melanina (MCH) es un neuropéptido que funciona como un neurotransmisor modulador y es producido por neuronas del hipotálamo que inervan diferentes regiones del sistema nervioso central, entre ellas el núcleo dorsal del rafe (NDR). En este núcleo se localizan la mayoría de las neuronas serotoninérgicas, células con un rol preponderante en diversos procesos fisiológicos y patológicos. Estudios previos de nuestro grupo utilizando abordajes morfológicos, fisiológicos y neuroquímicos han demostrado que la MCH modula el NDR induciendo un aumento en el sueño REM y produciendo efectos pro-depresivos en ratas. El presente proyecto plantea profundizar en los mecanismos celulares subyacentes a esta modulación estudiando la internalización de la MCH a través de su receptor MCHR1 y sus efectos intracelulares en neuronas serotoninérgicas y GABAérgicas in vivo y en cultivos celulares. Para ello inyectaremos la MCH conjugada con un fluoróforo en el NDR de ratas a través de cánulas implantadas estereotáxicamente. Estudiaremos el curso temporal de su internalización en las neuronas serotoninérgicas y GABAérgicas utilizando inmunohistoquímica y microscopía confocal, ya sea en condiciones controles como en presencia de inhibidores de la endocitosis mediada por clatrina o antagonistas de los MCHR1. Para abordar los estudios de los efectos intracelulares de la activación de MCHR1 por la MCH se utilizarán cultivos primarios de romboencéfalo, enriquecidos en células serotoninérgicas. Luego de caracterizar los diferentes fenotipos celulares en el cultivo y confirmar la presencia del MCHR1, se determinará el curso temporal de internalización de la MCH conjugada al fluoróforo y los efectos de inhibidores de la endocitosis o antagonistas MCHR1 sobre la internalización en neuronas serotoninérgicas y GABAérgicas. Por ensayos bioquímicos, se cuantificarán los niveles de calcio intracelular utilizando sondas fluorescentes (Fura-2 AM y Rhod2) y los niveles de AMPc en el medio de cultivo luego de la estimulación del MCHR1. Este proyecto se basa en una hipótesis novedosa, que plantea que el sistema MCHérgico, un sistema de neurotransmisión peptidérgico, podría estar involucrado en la patología de la depresión. El tratamiento actual de pacientes afectados por depresión tiene como blanco principal a los sistemas monoaminérgicos, por lo que estos estudios podrían acercarnos a nuevas estrategias farmacológicas para el tratamiento de dicha patología. Como es sabido, en la clínica, existe un gran porcentaje de pacientes que no responden de forma adecuada a los tratamientos disponibles. Este sistema neuropeptídico mediado por la MCH podría ser un sistema alternativo a ser considerado para el tratamiento de la depresión.