Identificación molecular de levaduras del género Cándida.

La candidiasis profunda es una infección grave con elevada morbi-mortalidad. C. albicans es la especie predominante en candidiasis invasivas o profundas, sin embargo en las últimas décadas se ha visto un cambio epidemiológico estando las especies no-albicans mundialmente en aumento. Esta reciente emergencia mundial de levaduras del género Candida diferentes de albicans, en especial C. glabrata y C. krusei, y el uso cada vez más frecuente de derivados azólicos para su tratamiento, produjo un cambio en la distribución de las especies de levaduras así como de la aparición de especies resistentes. Teniendo en cuenta las diferencias en las susceptibilidades a los antifúngicos entre las especies de Candida, la identificación a nivel de especie tiene un papel importante en el tratamiento de la candidiasis. La identificación de levaduras se puede realizar de forma morfológica, bioquímica, inmunológica o genética. Los métodos convencionales basados en las características morfológicas o fisiológicas son laboriosos, requieren de aproximadamente 48 a 72 hr, no siendo muchas veces lo suficientemente específicos a la hora de la caracterización de la especie. Por su parte los métodos moleculares tiene la ventaja de que el tiempo estimado es menor (7 horas) y son más específicos. Otra ventaja que proponen es la posibilidad de la identificación del patógeno sin la necesidad del cultivo de este El diagnóstico molecular puede dividirse en los que utilizan técnicas basadas en el ADN y en las que por el contrario no. Las técnicas basadas en la utilización del ADN en su mayoría utilizan diferentes técnicas de PCR, algunos ejemplos son: MLST, RLFP, RAPD, t-RLFP, etc. Para detectar ADN fúngico e identificación de especies la región más utilizada es la que incluye el complejo ribosomal, genes 18S, 5.8S, 28S. Estos contienen secuencias conservadas, dominios variables y regiones espaciadoras internas (ITS). Estas son muy variables por lo que pueden ser utilizadas para la identificación a nivel de especie. Esta región de espaciadores incluye los espaciadores intragénicos ITS1 e ITS2 y el gen de la subunidad 5.8S. La Reacción de Cadena de Polimerasa (PCR) es una técnica que se utiliza para amplificar una secuencia blanco de ADN. Consiste en tres pasos que se repiten cíclicamente. Restriction Fragment Length Polymorphism, es una técnica que se basa en el polimorfismo de la secuencia de ADN. Este método es utilizado para la identificación a nivel de especie, una vez ya se haya realizado la identificación a nivel de género. Por medio de este trabajo se pretende caracterizar molecularmente aislamientos provenientes de candidiasis profundas, comparar esta caracterización molecular de las levaduras del género Candida con la identificación fenotípica y por ultimo contribuir con una aproximación a la epidemiología molecular de las candidiasis profundas en nuestro país.