EVALUACIÓN DEL EFECTO DE LA CRIOPRESERVACIÓN SOBRE EL POTENCIAL DE MULTIDIFERENCIACIÓN Y CRECIMIENTO IN VITRO DE LAS CÉLULAS MADRE MESENQUIMALES DERIVADAS DE TEJIDO ADIPOSO EQUINO

Las células madre mesenquimales (CMM) son células que tienen la capacidad de diferenciarse en varias células, tales como osteoblastos (hueso), condrocitos (cartílago), adipocitos (grasa), miocitos (músculo) y tenocitos (tendones). Las CMM se utilizan cada vez más en la generación y reparación de tejidos. Para demostrar su multipotencialidad in vitro se debe proporcionar a las CMM indiferenciadas un microambiente determinado que conduzca su diferenciación hacia diversos linajes. Para almacenar las células un largo periodo de tiempo, se utiliza la criopreservación, tecnología que permite contar con CMM almacenadas para un eventual uso terapéutico. No está descrito si el proceso de criopreservación puede afectar la multipotencialidad de las CMM derivadas de tejido adiposo (TA) equino. Esta información resulta fundamental para su futuro uso en nuevas terapias celulares en equinos de alta élite deportiva. El usar CMM-TA criopreservadas reduce los plazos de aplicación. Es importante la celeridad con que se haga la terapia, pero es más importante aún determinar que las células se conserven indiferenciadas al momento del implante. Es importante comenzar a caracterizar las células ya que no existen datos, ni trabajos realizados en Uruguay y sería ventajoso para futuros usos experimentales y de terapéutica. El objetivo del trabajo será evaluar cómo afecta la criopreservación las características de crecimiento (cinética de crecimiento) y diferenciación (en tres linajes de células: adipocitos, condrocitos y osteocitos) in vitro de las CMM-TA equinas. Las muestras de tejido adiposo serán extraídas de 5 equinos adultos entre 3 y 12 años. La extracción de muestras se realizará sobre la zona superior del glúteo en la base de la cola.El protocolo de cultivo primario de CMM-TA será expandido hasta el pasaje 6. De Los cultivos obtenidos serán criopreservados en los distintos pasajes en freezer a -80 ºC y otras alícuota en nitrógeno líquido a -196 ºC por un período de 4 meses. Algunas muestras serán mantenidas en cultivo y en los pasajes segundo y cuarto, se procederá a la inducción de diferenciación in vitro con el medio de cultivo apropiado, para obtener una diferenciación adipogénica, condrogénica y osteogénica. Se comparara el comportamiento de las CMM-TA en pases 2 y 4, frescas y congeladas.