Evaluación de toxicidad crónica en Apis mellifera, tras exposición a aceites esenciales con actividad anti-varroa

La mortandad de colonias de abejas melíferas está asociada a pérdidas económicas y ha aumentado en las últimas décadas a nivel mundial y en Uruguay en particular. En este último, el ácaro Varroa destructor (Mesostigmata: Varroidae), se presenta como la mayor amenaza biológica para A. mellifera. Los acaricidas sintéticos son la primera línea de defensa frente a Varroa, aunque ya se han identificado limitantes para su uso: desarrollo de resistencia y presencia de residuos en productos apícolas. En forma alternativa, se han estudiado aceites esenciales (AEs) naturales con actividad anti-varroa. En general, la toxicidad de los AEs en abejas ha sido estudiada en base a efectos agudos y no subletales. La evaluación de estos últimos es una necesidad en el desarrollo de nuevos pesticidas. En Uruguay se han aislado e identificado AEs de especies de flora nativa y se ha testeado su capacidad anti-varroa e inocuidad para abejas mediante estudios de toxicidad aguda en laboratorio. Este trabajo propone evaluar cuantitativamente efectos subletales de AEs aislados de Aloysia spp. (incluyendo Aloysia gratissima), sobre dos tipos de señales químicas de abejas: hidrocarburos cuticulares (HCC) y oleato de etilo (OE); y sobre la expresión de vitelogenina (Vg) y genes de inmunidad. La colecta del material vegetal se realizará en la localidad Fraile Muerto (Cerro Largo, Uruguay). Los AEs se obtendrán por hidrodestilación por arrastre con vapor y se identificarán mediante cromatografía gaseosa y detector de masas en tándem (GC/MS). Se realizarán bioensayos de toxicidad aguda y crónica con abejas de ca. 5 días de edad. Durante los ensayos se les ofrecerá alimento “Candy”. En los primeros se cuantificará la bioactividad del preparado mediante la determinación de DL50 en 4 grupos por triplicado: AE en etanol (tratamiento), etanol (control de solvente), nada (control negativo), o formulación comercial a base de timol (tratamiento convencional). Se registrará mortandad a las 24 y 48 hrs. Para los segundos, se aplicarán diluciones del AE o del preparado comercial en etanol y controles correspondientes, a dosis subletales. A los 10 y 21 días se sacrificarán las abejas. Para el análisis de HCC y EO se realizarán pools de 5 abejas por réplica, a partir de los cuales se obtendrán homogeneizados totales. De estos últimos se obtendrán fracciones separadas para HCC y EO que serán luego analizadas por GCMS. La determinación de Vg se realizará por Western blot a partir de muestras de hemolinfa obtenidas para cada ejemplar. La expresión de Vg y genes de inmunidad será determinada por qRT-PCR a partir de homogeneizados totales obtenidos para cada ejemplar. A partir de estos ensayos se obtendrá la información sobre los efectos subletales de la exposición crónica a los AEs testeados y al preparado comercial. Los datos se analizarán mediante ANOVA con comparaciones ad-hoc y mediante análisis Probit en la determinación de DL50. Se espera aportar al diseño de bioplaguicidas para la apicultura, eficaces en el tratamiento anti-varroa y sin efectos secundarios adversos.