Transporte axonal de ARNs: caracterización de mensajeros asociados a ZBP1/IMP1 y Myosina Va

Como la mayoría de las células altamente polarizadas, la morfología de las neuronas determina una logística específica de abastecimiento de proteínas a zonas distales del axón. El mismo no solo es necesario para el mantenimiento y viabilidad de la masa axoplásmica en el estado estacionario, sino también para satisfacer los requerimientos necesarios en procesos tales como la regeneración. Las posibles fuentes de proteínas axonales incluyen: proteínas traducidas en el cuerpo celular y transportadas hacia los axones, proteínas traducidas localmente en el compartimiento axonal, y proteínas traducidas en otras células y transferidas hacia el axón. El transporte tanto de la maquinaria traduccional como de los ARNm que van a ser traducidos ocurre a través de motores moleculares (quinesinas, dineínas y miosinas). El ARNm transportado se encuentra formando parte de ribonucleopartículas, que contienen proteínas de unión al ARN (las cuales reconocen señales en cis en las regiones no traducidas de los mensajeros), motores moleculares, y pueden poseer o no ribosomas y proteínas de represión de traducción. Una de las proteínas de unión a ARN más estudiada en células nerviosas ha sido la ZBP1. Se ha descrito que tanto los filamentos de actina como los microtúbulos son utilizados para localizar las partículas que contienen a ZBP1 y el mensajero de la β-actina (uno de sus blancos). Con estos resultados y la hipótesis de que la localización de las cargas se lleva a cabo en dos pasos (en los cuales se requieren la participación tanto de quinesinas como de miosinas), se plantea que ZBP1 pueda actuar como adaptador entre los ARNm y los motores moleculares asociado tanto a microtúbulos como a actina. El objetivo del presente proyecto es contribuir al conocimiento de los mecanismos involucrados en el transporte de ARNs en axones mielínicos adultos. Mediante la utilización de la técnica RIP-Seq (inmunoprecipitación de proteína asociada a ARNs y la posterior secuenciación de los mismos) se intentará describir qué mensajeros se encuentran asociados a ZBP1 y Miosina Va. Se analizará la ontología de dichos mensajeros, así como también se hará un análisis exhaustivo de los 5´ y 3´UTRs de los mismos, buscando señales de transporte que sean reconocidas por ZBP1. Asimismo, se comparará el set de mensajeros asociados tanto a ZBP1 como a MyoVa con aquellos mensajeros presentes en el axoplasma, con el fin de identificar si existen diferencias entre la ontología y señales del set completo, comparados con aquellos que se encuentran dentro del axón.