Ácido Nitroaraquidónico como nuevo compuesto anti-inflamatorio: modulación de la actividad Protein Disulfuro Isomerasa (PDI) y su rol en la activación de la NADPH oxidasa 2 (NOX2)

Durante un proceso inflamatorio, estímulos intra- y extracelulares activan células inflamatorias para ejercer una respuesta que incluye la producción de una variedad de mediadores químicos como por ejemplo el radical anión superóxido (O2.-). La modulación de la producción exacerbada de especies reactivas puede evitar efectos deletéreos devenidos de la acción de dichas especies en las células de nuestro organismo. Nuestro laboratorio ha demostrado que el nitroalqueno derivado de la nitración del ácido araquidónico, el Ácido Nitroaraquidonico (NO2AA), presenta acciones anti-inflamatorias como ser la regulación de la expresión de la óxido nítrico sintasa inducible, la ciclooxigenasa-1 y -2 así como la inhibición de la secreción de citoquinas pro-inflamatorias en macrófagos activados. Recientemente hemos reportado que el NO2AA inhibe la actividad de la NADPH oxidasa fagocítica (NOX2), responsable de la formación de O2.- en el fagosoma, previniendo la formación del complejo activo de la enzima en la membrana por un mecanismo aún no determinado. Trabajos recientes indican que durante la formación del complejo activo de la NOX2 participa la proteína disulfuro isomerasa (PDI). La PDI es una enzima responsable de facilitar el plegamiento correcto de proteínas por la formación de enlaces disulfuros con residuos de cisteínas en su sitio activo. Como los nitroalquenos son potentes electrófilos, un posible mecanismo de la inhibición de NOX2 por NO2AA puede implicar la formación de un aducto covalente de Michael entre el NO2AA y residuos críticos de cisteína a nivel de la PDI o de subunidades de la NOX, evitando así la formación de la forma activa de la enzima en la membrana. Resultados preliminares muestran la capacidad del NO2AA de inhibir la actividad reductasa de PDI in vitro. Además mediante estudios de microscopia confocal, observamos que el NO2AA es capaz de generar cambios morfológicos celulares en macrófagos activados por PMA en presencia de NO2AA. De acuerdo a nuestros reportes previos y los resultados preliminares obtenidos, nos planteamos como objetivo de trabajo elucidar los mecanismos de inhibición de NOX2 por NO2AA en macrófagos, mediante el análisis y estudio de la interacción de NO2AA con componentes de la enzima así como de la PDI. Además determinar si la modificación de éstos, y la consiguiente modulación de la actividad de ambas enzimas, permiten explicar los efectos antiinflamatorios observados. El éxito de este estudio nos permitirá diseñar estrategias para utilizar los nitroalquenos como potenciales fármacos antiinflamatorios.